紫外可見分光光度計(jì)是一種應(yīng)用很廣的分析儀器，應(yīng)用領(lǐng)域涉及制藥、醫(yī)療衛(wèi)生、化學(xué)化工、計(jì)量科學(xué)、農(nóng)業(yè)、林業(yè)、漁業(yè)等領(lǐng)域中的科研、教學(xué)等各個(gè)方面，用來進(jìn)行定性分析、純度檢查、結(jié)構(gòu)分析、絡(luò)合物組成及穩(wěn)定常數(shù)的測(cè)定、反應(yīng)動(dòng)力學(xué)研究等。

紫外可見分光光度計(jì)原理介紹：

紫外可見分光光度法的定量分析基礎(chǔ)是朗伯-比爾(Lambert-Beer)定律。即物質(zhì)在一定濃度的吸光度與它的吸收介質(zhì)的厚度呈正比。
物質(zhì)的顏色和它的電子結(jié)構(gòu)有密切的關(guān)系,當(dāng)輻射(光子)引起電子躍遷使(或離子)從基 態(tài)上升到激發(fā)態(tài)時(shí),(或離子)就會(huì)在可見區(qū)或紫外呈現(xiàn)吸光,顏色的發(fā)生或變化是和分 子的正常電子結(jié)構(gòu)的變形的。當(dāng)中含有一個(gè)或更多的生色基因(即具有不飽和鍵的 原子基團(tuán)),輻射就會(huì)引起中電子能量的改變。
如果兩個(gè)生色團(tuán)之間隔一個(gè)碳原子,則形成共軛基團(tuán),會(huì)使吸收帶移向較長的波長處(即紅 移),且吸收帶的強(qiáng)度顯著增加。當(dāng)中含有助色基團(tuán)(有未共用電子對(duì)的基團(tuán))時(shí),也會(huì) 產(chǎn)生紅移效應(yīng)。常見的助色基團(tuán)有:-OH -NH2, -SH, -Cl, -Br, -I

紫外可見分光光度計(jì)的應(yīng)用介紹：

(1) 定量分析
根據(jù)瑯伯-比爾定律，樣品的濃度和吸光度是成正比關(guān)系的，濃度越大，吸收值越高，所以分光光度計(jì)用的多的還是定量分析，定量分析的種類有很多，這里介紹常用的幾種定量分析方法：
A、法：法是紫外可見分光光度計(jì)諸多分析方法中使用多的一種方法。這是一種以瑯伯-比爾定律A=εbC為基礎(chǔ)的分析方法，某一物質(zhì)在一定波長下ε值是一個(gè)常數(shù)，石英比色皿的光程是已知的，也是一個(gè)常數(shù)。因此，可用紫外可見分光光度計(jì)在λmax波長處，測(cè)定樣品溶液的吸光度值A(chǔ)。然后，根據(jù)瑯伯比爾定律求出C=A/εb，則可求出該樣品溶液的含量或濃度。
B、標(biāo)準(zhǔn)法：在選定的波長處，在相同的測(cè)試條件下，分別測(cè)試標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液C標(biāo)和被測(cè)試樣品溶液C樣的吸光度A標(biāo)和A樣。然后，按下式求得樣品溶液的濃度或含量。
C樣=A樣/A標(biāo)×C標(biāo)
C、標(biāo)準(zhǔn)曲線法
紫外可見分光光度計(jì)常用的定量分析方法是標(biāo)準(zhǔn)曲線法。即先用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)配制一定濃度的溶液，再將該溶液配制成一系列的標(biāo)準(zhǔn)溶液。在一定波長下，測(cè)試每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度，以吸光度值為縱坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)溶液對(duì)應(yīng)得濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。后，將樣品溶液按標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制程序測(cè)得吸光度值，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出樣品溶液對(duì)應(yīng)的濃度或含量。
A、 其它分析方法
除上述幾個(gè)分析方法外經(jīng)常使用的分析方法外，還有比吸收系數(shù)法、小二乘法、解聯(lián)立方程法和示差分光光度法。
(2) 定性分析
如果未知物的紫外吸收光譜的大吸收峰波長λmax、小吸收峰波長λmin、大摩爾吸光系數(shù)εmax，以及吸收峰的數(shù)目、位置、拐點(diǎn)與標(biāo)準(zhǔn)光譜數(shù)據(jù)一致，就可以認(rèn)為是同一種化合物。定性分析的主要目的是知道分析樣品中是什么物質(zhì)。
定量分析和定性分析是分光光度計(jì)的兩大主要功能，特別是定量分析。其它的分析都應(yīng)該是從這兩大種功能中發(fā)展出來的。